ABSTRACT
ABSTRACT Background: Latent HIV-1 is a major hurdle in obtaining HIV-1 sustained virological remission (SVR). Here we explored histone deacetylation inhibition property of nicotinamide (NAM; n = 17) for the first time in comparison to a combination of methyltransferase inhibitors (MTIs; Chaetocin and BIX01294; n = 25) to reactivate latent HIV ex vivo in CD8-depleted PBMCs from antiretroviral treated aviremic individuals. Results: NAM reactivated HIV-1 from 13/17 (76.4%) samples compared to 20/25 (80.0%) using MTIs with mean viral load (VLs) of 4.32 and 3.22 log10 RNA copies/mL, respectively (p = 0.004). Mean purging time after NAM and MTIs stimulation was 5.1 and 6.75 days, respectively (p = 0.73). Viral purging in autologous cultures exhibited blunted HIV recovery with fluctuating VLs followed by a complete viral extinction when expanded in allogenic system. Electron microscopy from five supernatants revealed anomalous viral particles, with lack of complete viral genomes when characterized by ultradeep sequencing through metagenomics approach (n = 4). Conclusion: NAM alone was more potent HIV-1 activator than combination of MTIs, with potential of clinical use.
Subject(s)
Adult , Female , Humans , Male , Middle Aged , Young Adult , Quinazolines/pharmacology , Azepines/pharmacology , Virus Activation/drug effects , HIV Infections/virology , HIV-1/drug effects , Niacinamide/pharmacology , Methyltransferases/antagonists & inhibitors , Piperazines/pharmacology , Leukocytes, Mononuclear/virology , CD4-Positive T-Lymphocytes , Gene Expression Regulation, Viral , Virus Latency , Viral Load/drug effects , Viral Tropism/drug effectsABSTRACT
A expressão do oncogene E7 do HPV de alto risco é um dos responsáveis pela carcinogênese cervical, através da sua interferência sobre a via Cdk-Rb-E2F resultando na progressão do ciclo celular anormal e superexpressão das proteínas p16 e Ki-67. O objetivo deste estudo descritivo foi avaliar, em estudo de corte transversal, a positividade das expressões imunocitoquímicas das proteínas p16 e Ki-67 e sua distribuição celular, nas 199 amostras citológicas de base líquida (CBL) de casos com diagnóstico negativo e ASC-US com testesde HPV de alto risco positivo determinados em pelo menos um dos métodos de PCR e/ou HC2. Através da técnica imunocitoquímica, a expressão positiva da proteína p16 foi observada no citoplasma e núcleo enquanto que a proteína Ki- 67 foi apenas nuclear, quando comparada aos seus respectivos controles positivos. A proteína p16 foi positiva em 71/101 amostras de citologia negativa e em 12/16 amostras ASC-US, ambas associadas aos testes de HC2 e/ou PCR positivos para HPV de alto risco. A proteína Ki-67 foi positiva em 76/101 amostras de citologia negativa e em 12/16 amostras ASC-US, ambas também associadas aos testes de HC2 e/ou PCR positivos para HPV de alto risco. A proporção de positividade de Ki-67 aumentou em paralelo com o aumento do grau da positividade de p16 (p 0,001). A expressão da proteína p16 e proteína Ki-67 em amostras citológicas cérvico-vaginais colhidas em meio líquido, com HC2 e/ou PCR positivos para HPV de alto risco em casos com diagnóstico citológico negativo ou ASCUS detectou precocemente a presença de DNA-HPV através da imuno-expressão destas proteínas. Concluímos que estes resultados poderão ser utilizados em estratégias de programas de prevenção, e monitorar com eficiência e efetividade pacientes que poderão desenvolver lesões mais graves, através da detecção precoce das alterações do mecanismo de controle do ciclo celular.
Subject(s)
Immunohistochemistry , Vaginal Smears , Cytological TechniquesABSTRACT
A expressão do oncogene E7 do HPV de alto risco é um dos responsáveis pela carcinogênese cervical, através da sua interferência sobre a via Cdk-Rb-E2F resultando na progressão do ciclo celular anormal e superexpressão das proteínas p16 e Ki-67. O objetivo deste estudo descritivo foi avaliar, em estudo de corte transversal, a positividade das expressões imunocitoquímicas das proteínas p16 e Ki-67 e sua distribuição celular, nas 199 amostras citológicas de base líquida (CBL) de casos com diagnóstico negativo e ASC-US com testesde HPV de alto risco positivo determinados em pelo menos um dos métodos de PCR e/ou HC2. Através da técnica imunocitoquímica, a expressão positiva da proteína p16 foi observada no citoplasma e núcleo enquanto que a proteína Ki- 67 foi apenas nuclear, quando comparada aos seus respectivos controles positivos. A proteína p16 foi positiva em 71/101 amostras de citologia negativa e em 12/16 amostras ASC-US, ambas associadas aos testes de HC2 e/ou PCR positivos para HPV de alto risco. A proteína Ki-67 foi positiva em 76/101 amostras de citologia negativa e em 12/16 amostras ASC-US, ambas também associadas aos testes de HC2 e/ou PCR positivos para HPV de alto risco. A proporção de positividade de Ki-67 aumentou em paralelo com o aumento do grau da positividade de p16 (p 0,001). A expressão da proteína p16 e proteína Ki-67 em amostras citológicas cérvico-vaginais colhidas em meio líquido, com HC2 e/ou PCR positivos para HPV de alto risco em casos com diagnóstico citológico negativo ou ASCUS detectou precocemente a presença de DNA-HPV através da imuno-expressão destas proteínas. Concluímos que estes resultados poderão ser utilizados em estratégias de programas de prevenção, e monitorar com eficiência e efetividade pacientes que poderão desenvolver lesões mais graves, através da detecção precoce das alterações do mecanismo de controle do ciclo celular.
Subject(s)
Cytological Techniques , Vaginal SmearsABSTRACT
Avalia os aspectos técnicos do DCS, com diferentes protocolos, em um primeiro experimento com 144 amostras. Em segundo experimento, com 50 amostras, estuda os achados com 3o segundos de vórtex
Subject(s)
Humans , Female , Adult , Cell Biology , Technology Assessment, BiomedicalABSTRACT
Objetica comparar o diagnóstico morfológico microbiológico obtido entre o material preparado com o DCS e o de esfregaços convencionais